Sau khi Mateen cố thủ trong nhà vệ sinh cùng với con tin tại CLB Pulse, cảnh sát cố gắng tạo ra một lỗ trên bức tường. Khi việc làm này không thành, cảnh sát sử dụng xe bọc thép Bearcat để phá tường. Ban đầu, một cảnh sát làm việc tại CLB (làm thêm ngoài giờ) chiến đấu với Mateen. Sau đó, nhiều cảnh sát lao tới hiện trường vụ đấu súng.
Cảnh sát trưởng thành phố Orlando, ông John Mina, cho biết, từ trong nhà vệ sinh, Mateen gọi điện cho cảnh sát, tuyên bố trung thành với lực lượng Nhà nước Hồi giáo (IS).
Sau khi tường nhà vệ sinh bị xe thiết giáp chọc thủng, hàng chục người đi qua lỗ hổng. Mateen cũng chui ra và bị cảnh sát bắn chết, ông Mina nói. Tính đến đêm 13/6, có 33 nạn nhân, gồm 29 nam giới và 4 phụ nữ, đã được xác định danh tính.
Mateen là công dân Mỹ gốc Afghanistan, sinh ra ở New York, sống ở Florida, không có tên trong danh sách nghi phạm khủng bố cần theo dõi. Tuy nhiên, Cục Điều tra Liên bang Mỹ (FBI) phỏng vấn Mateen hai lần trong giai đoạn 2013-2014 sau khi hắn ta nhận xét dữ dội về một đồng nghiệp. Sau đó, FBI ngừng điều tra vụ việc.
Trước vụ tấn công, Mateen mua một số khẩu súng một cách hợp pháp. Hắn sử dụng 2 khẩu súng, trong đó có một khẩu súng trường bán tự động AR-15 trong vụ xả đạn đẫm máu. Seddique Mateen, cha của tay súng, nói rằng, ông không biết con trai mình “giữ hận thù trong tim”.
Một công ty an ninh tên là G4S mà Mateen từng làm việc nói rằng, hắn ta hai lần phải khám bệnh. Hai lần khám bệnh năm 2007 và 2013 không cho thấy vấn đề gì. Theo G4S, Mateen mang theo súng là để phục vụ công việc.
Sitora Yusufiy chung sống với Mateen trong 4 tháng hồi năm 2009. Cô nói rằng, gia đình cô đã giải cứu cô khỏi người chồng vũ phu Mateen. Yusufiy kể Mateen thường xuyên đánh đập cô vì những lý do nhỏ nhặt như giặt giũ quần áo. “Khi nổi giận, hắn ta trở nên bất ổn về tâm thần”, cô nói.
Tổng thống Mỹ Barack Obama gọi vụ tấn công của Mateen là “hành động khủng bố” và “hành động thù hận”. Ứng viên tổng thống đảng Cộng hòa Donald Trump nói rằng, nước Mỹ cần chặn dòng người tị nạn Syria để ngăn những vụ tấn công tương tự xảy ra. Tỷ phú Trump cũng trách cộng đồng Hồi giáo không báo cáo trường hợp Mateen cho chính quyền.