Ải Mỹ Nhân lấy bối cảnh những năm đầu thế kỷ 20, nội dung phim xoay quanh câu chuyện gia đình ông hội đồng Thanh (NSƯT Thanh Điền) giàu có nổi tiếng đất Cù Lao. Ông hội đồng Thanh có bốn bà vợ gồm bà Cả (Thiên Hương), bà Hai (Đan Thy), bà Tư (Dương Cẩm Lynh) với những cảnh tình éo le, nhiều khúc mắc rắc rối, mâu thuẫn, yêu, ghét, hận thù…
Ông hội đồng Thanh (NSƯT Thanh Điền)
Bà Cả (Thiên Hương)
Bà Hai (Đan Thy)
Bà Ba (Trương Hải Vân)
Bà Tư (Dương Cẩm Lynh)
Nhờ con trai là Hậu Sanh (Lương Thế Thành) chăm chỉ, tháo vác chăm lo việc làm ăn của gia đình nên ông Thanh có thời gian vui thú. Ông Thanh quen được cô ca nữ Phụng Kiều xinh đẹp nổi tiếng ở một tửu lầu. Say mê giọng hát ngọt ngào và vẻ ngoài sắc sảo của cô nên ông Thanh quyết rước Phụng Kiều về làm bà Tư của mình. Dù chênh lệch tuổi tác nhưng Phụng Kiều quyết tâm trở thành vợ Tư nhà Hội đồng với mục đích trả mối thù trong quá khứ giữa gia đình ông Thanh Điền và gia đình cô.
Để thực hiện kế hoạch trả thù, bà Tư tìm cách lôi kéo, gây xào xáo trong gia đình và dùng nhiều thủ đoạn để triệt hạ những ai gây bất lợi cho mình…
Bà Hai và ông Thời (NSƯT Công Ninh) vô tình chạm mặt nhau khi ông Thời trở thành phu xe, bà Hai vừa bất ngờ vừa vui khi thấy ông Thời còn sống. Sự xuất hiện của bà Tư làm sự hội ngộ giữa ông Thời và bà Hai bị gián đoạn.
NSƯT Công Ninh vai ông Thời
Một lần đi dạo cùng bà Tư, ông Thanh gặp lại bà Dịu, người tình đầu và cũng là người hầu trước đây của mình. Nhớ lại tình xưa ông Thanh cho người lần tìm tung tích của bà Dịu và bất ngờ khi phát hiện đứa con trai của hai người vẫn còn sống.
Con trai bà Dịu là Bình (Huy Cường) đang là phu xe cùng cù lao, sợ mẹ con bà về chiếm gia tài nên bà Tư đã cho người đốt nhà giết bà Dịu và gieo vào lòng Bình nỗi oán hận ông Thanh để anh vùng lên trả thù.
Đúng như âm mưu của bà Tư, Bình đường hoàng về làm cậu cả nhà nhà hội đồng Thanh, ăn chơi sa dọa và cờ bạc trác táng dù ai khuyên cũng không nghe. Ông Thanh quyết tìm người mai mối cho Bình để cậu chàng lo làm ăn.
Mai (Diệp Bảo Ngọc)
Trong tiệc vui vì quá chén, Sanh đã đi nhầm vào phòng Mai (Diệp Bảo Ngọc) - vợ sắp cưới của Bình ngủ. Vì danh dự hai gia đình, Sanh đành phải cưới Mai về làm vợ hai, khiến cho mâu thuẫn giữa Bình và Sanh càng lên cao. Thấy chồng cưới thêm vợ, Lụa (Thúy Diễm) đau buồn. Trước kia Lụa cũng là con gái nhà nghèo làm nghề bán cá ở chợ, tuy xinh đẹp nhưng tính tình chanh chua, đanh đá. Lụa lấy Sanh để có tiền chữa bệnh cho mẹ nên luôn coi Sanh chỉ là chồng hờ của mình. Nhưng sau một thời gian chung sống, thấy tính tình Sanh hiền lành, thật thà lại thương người nên đã nảy sinh tình cảm.
Sanh (Lương Thế Thành) và Lụa (Thúy Diễm)
Dù cưới Mai về nhưng, trong lòng Sanh chỉ có Lụa nên hững hờ với Mai khiến cô tức tối. Mai quyết tâm loại trừ Lụa để độc chiếm Sanh.
Ải Mỹ Nhân không chỉ phản ánh những mối mâu thuẫn gia đình từ hệ quả của chế độ đa thê mà còn đề cập đến thực trạng phân biệt giai cấp tạo ra một khoảng cách lớn giữa ông chủ và người làm, giữa hội đồng và người nông dân. Câu chuyện “một ông bốn bà”, những dòng xúc cảm ân tình, những oán hận hờn ghen, dã tâm, tham vọng… cùng dàn kiều nữ xinh như hoa trong những cảnh phim cổ trang đậm màu văn hóa Việt của Ải Mỹ Nhân dự báo sẽ gây sóng gió trong dư luận khán giả xem phim.
